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技術(shù)文獻(xiàn)

血清污染和過濾的相關(guān)問題解答
閱讀次數(shù):971 發(fā)布時(shí)間:2022/9/27 9:51:14
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  1、問:懷疑購買的Gibco胚胎干細(xì)胞用胎牛血清(Gibco ES用胎牛血清)染菌,想用濾膜過濾一下,可否自己用0.22μm濾膜過濾?對(duì)血清性質(zhì)有多大影響?有做過的么?

答:可以過濾的,血清當(dāng)出廠時(shí)都是0.22μm或0.1μm過濾除菌。想證明有沒有染菌不用過濾這么麻煩,只要放置于37℃過夜就可以了,如果有微生物污染會(huì)變渾濁的,如果還是澄清的就說明沒有問題的。實(shí)驗(yàn)室中血清很難直接過濾,一般要加到培養(yǎng)基中再過濾。我們實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基時(shí),都使用濾膜過濾,一般而言如果制備1-2瓶培養(yǎng)基,一個(gè)濾膜及一支30ml注射器可以過濾50ml小牛血清。如果大量制備培養(yǎng)基也可以將血清加到培養(yǎng)基中,使用0.22微米的大濾膜一起過濾。
2、問:我懷疑我用的完/全1640培養(yǎng)液被污染了,準(zhǔn)備重新過濾消毒,過濾后是否需要補(bǔ)充胎牛血清?如需又如何補(bǔ)充?

答:完/全1640培養(yǎng)液被污染了,如果是支原體的話,過濾沒有作用,支原體可以通過濾膜。我們用1640液,都是配液后保留500ml,然后其他的分裝100-200ml,現(xiàn)用現(xiàn)配因?yàn)檠灞?640要貴,如果你想過濾的話,建議你加原比例血清,因?yàn)镚ibco牛血清不會(huì)很容易通過濾膜。主要的還是找到可能污染的原因。

3、問:加好了Gibco牛血清雙抗的培養(yǎng)基由于污染了再過濾后還能用嗎?

答:建議不要用了。在加了雙抗的情況下已經(jīng)污染,那么細(xì)菌污染的可能性會(huì)較小了。一般的過濾除不能去除病毒或者部分真菌的污染的。

4、問:我準(zhǔn)備把使用的完/全1640培養(yǎng)液重新過濾一遍,不知道培養(yǎng)液中的血清成分是否能通過濾膜,過濾后是否還需要補(bǔ)充胎牛血清?如需又如何補(bǔ)充?

答:可以透過,但是隨著液體量的增多會(huì)很慢,如果不加壓會(huì)比較麻煩,還有/好用低蛋白吸附的,不然損失是比較大的。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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