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可見分光光度法的基本原理
閱讀次數(shù):983 發(fā)布時間:2022/12/13 9:38:49
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可見分光光度法的基本原理利用的是朗伯—比耳定律。

布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度成正比:A∝b 。

1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有成正比的關(guān)系:A∝ c 。

二者的結(jié)合稱為朗伯—比耳定律:當(dāng)一束平行的單色光通過均勻、非散射的稀溶液時,溶液對光的吸收程度與溶液的濃度及液層厚度的乘積成正比。

可見分光光度法的基本原理詳解:


1、當(dāng)一束強度為I0的單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液后,由于一部分光被體系吸收,因此透射光的強度降至I,則溶液的透光率T為:T=(I0-I)/I0

2、根據(jù)朗伯(Lambert)-比爾(Beer)定律:A=abc。

式中A為吸光度,b為溶液層厚度(cm),c為溶液的濃度(g/dm^3), a為吸光系數(shù)。其中吸光系數(shù) 與溶液的本性、溫度以及波長等因素有關(guān)。溶液中其他組分(如溶劑等)對光的吸收可用空白液扣除。

3、由上式可知,當(dāng)溶液層厚度b和吸光系數(shù)a固定時,吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時,先需要測定溶液對不同波長光的吸收情況(吸收光譜),從中確定/大吸收波長 ,然后以此波長 的光為光源,測定一系列已知濃度c溶液的吸光度A,作出A~c工作曲線。在分析未知溶液時,根據(jù)測量的吸光度A,查工作曲線即可確定出相應(yīng)的濃度。這便是分光光度法測量濃度的基本原理。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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