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技術(shù)文獻(xiàn)

Western blot出現(xiàn)兩個(gè)目標(biāo)蛋白條帶?
閱讀次數(shù):1967 發(fā)布時(shí)間:2022/12/16 9:55:02
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1.因?yàn)閃B的一抗識(shí)別的蛋白質(zhì)的表位是順序表位,不是空間表位,所以WB狀態(tài)下的抗原-抗體識(shí)別,與非變性的生理?xiàng)l件下的抗原-抗體識(shí)別不同。

2.WB之,先用分子篩純化同時(shí)也是檢測一下目的蛋白產(chǎn)物是否成功。也就是目的蛋白是否成功表達(dá)了,而且在提取后穩(wěn)定存在了。

3.非特異性的條帶分子量偏大可能是SDS PAGE出的問題,膠的濃度不合適或者樣品溶解度不夠或者電泳時(shí)間不合適等,造成了目的條帶的表觀質(zhì)量變大。

4.三個(gè)非特異性的分子量偏大條帶可能是目的蛋白在SDS PAGE出的問題出了問題,另外兩個(gè)帶可能本來就是雜帶了?梢曰厥蘸髮θ龡l帶用質(zhì)譜檢測精/確的分子量加以確定。

5.三個(gè)非特異性的分子量偏大條帶至少應(yīng)該有雜帶,雜帶出現(xiàn)而且與一抗相互作用,那么只能說雜帶的順序表位也能被一抗識(shí)別,必須更換一性更高的抗體。

6.還有考慮鎳柱親和分離的問題,是不是獲得了你的需要的目的蛋白質(zhì)。

1.因?yàn)閃B的一抗識(shí)別的蛋白質(zhì)的表位是順序表位,不是空間表位,所以WB狀態(tài)下的抗原-抗體識(shí)別,與非變性的生理?xiàng)l件下的抗原-抗體識(shí)別不同。

2.WB之,先用分子篩純化同時(shí)也是檢測一下目的蛋白產(chǎn)物是否成功。也就是目的蛋白是否成功表達(dá)了,而且在提取后穩(wěn)定存在了。

3.非特異性的條帶分子量偏大可能是SDS PAGE出的問題,膠的濃度不合適或者樣品溶解度不夠或者電泳時(shí)間不合適等,造成了目的條帶的表觀質(zhì)量變大。

4.三個(gè)非特異性的分子量偏大條帶可能是目的蛋白在SDS PAGE出的問題出了問題,另外兩個(gè)帶可能本來就是雜帶了?梢曰厥蘸髮θ龡l帶用質(zhì)譜檢測精/確的分子量加以確定。

5.三個(gè)非特異性的分子量偏大條帶至少應(yīng)該有雜帶,雜帶出現(xiàn)而且與一抗相互作用,那么只能說雜帶的順序表位也能被一抗識(shí)別,必須更換一性更高的抗體。

6.還有考慮鎳柱親和分離的問題,是不是獲得了你的需要的目的蛋白質(zhì)。

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