ELISA（雙抗體夾心法）檢測HBsAg

以已知抗體（抗HBs）包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體（酶標(biāo)抗HBs），酶標(biāo)抗體連接到抗原上，*后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。

一、材料

HBsAg試劑盒，本試劑盒含:

二、方法

1、加入待測標(biāo)本每孔0.05ml，并設(shè)HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔，然后加入酶結(jié)合物每孔1滴（0.05ml、空白對照孔不加），充分混勻后置37℃孵育30分鐘。

2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復(fù)五次后拍干。

3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴（0.05ml），然后再加顯色劑B每孔1滴（0.05ml），混勻，37℃孵育10分鐘。

4、每孔加終止液1滴（0.05ml），混勻。

三、結(jié)果

比色法:波長450nm，先用空白孔校零點(diǎn)，然后讀取各孔光密度值。

樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性，否則為陰性。

備注：陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實(shí)際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。

四、注意事項

1、elisa試劑盒置2℃～8℃保存。

2、使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。

3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔條，置室溫平衡30分鐘后再行測試，余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。

4、待測標(biāo)本不可用NaN3防腐。

5、不同批號試劑請勿通用。

6、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。

7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時，請置37℃至溶解。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司