麻豆国产一区二区三区,欧美 日韩 国产 免费,台湾成人午夜福利视频 ,最新在线日韩国产伦理网站

技術(shù)文獻(xiàn)

遠(yuǎn)慕教你快速構(gòu)建自己想要的目的質(zhì)粒
閱讀次數(shù):869 發(fā)布時(shí)間:2023/2/7 9:53:33
分享到:
載體構(gòu)建(vectorconstruction)是把連接好的DNA分子運(yùn)送到受體細(xì)胞中去。先,必須尋找一種能進(jìn)入細(xì)胞、在裝載了外來的DNA段后仍能照樣復(fù)制的運(yùn)載體。理想的運(yùn)載體是質(zhì)粒(plasmid),在基因工程中,常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體。當(dāng)給質(zhì)粒插入一段外源DNA段后,它依然能夠進(jìn)行自我復(fù)制。載體構(gòu)建是分子生物學(xué)研究常用的手段。

1.載體構(gòu)建

載體構(gòu)建(vectorconstruction):載體構(gòu)建是分子生物學(xué)研究常用的手段。主要包括已有載體多克隆位點(diǎn)(MCS)的改造和已有載體啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、篩選標(biāo)記等功能元件的改造。是為把DNA分子運(yùn)送到受體細(xì)胞中去,必須尋找一種能進(jìn)入細(xì)胞、在裝載了外來的DNA--片段后仍能照樣復(fù)制的運(yùn)載體。理想的運(yùn)載體是質(zhì)粒(plasmid),在基因工程中,常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體。載體構(gòu)建即是構(gòu)建含外源DNA的質(zhì)粒。

特點(diǎn):當(dāng)給質(zhì)粒插入一段外源DNA--片段后,它依然能夠進(jìn)行自我復(fù)制。

2.多克隆位點(diǎn)

多克隆位點(diǎn)(multiple cloning site, MCS),指的是包含數(shù)個(gè)(多20個(gè))限制性酶切位點(diǎn)(restriction site)的一段很短的DNA序列。也稱為多位點(diǎn)接頭(polylinker),是基因工程中常用到的載體質(zhì)粒的標(biāo)準(zhǔn)配置序列。MCS上含有多個(gè)單一酶切位點(diǎn),是外源DNA的插入部位,每個(gè)限制性酶切位點(diǎn)通常是唯1的,即它們在一個(gè)特定的載體質(zhì)粒中只出現(xiàn)一次。不同酶的酶切位點(diǎn)可有重疊。單一酶切位點(diǎn)就是只有一種特定的酶能夠識(shí)別并進(jìn)行酶切的位點(diǎn),多克隆位點(diǎn)一般是位于質(zhì)粒上的一段序列,這段序列含有很多個(gè)酶切位點(diǎn),但這些酶切位點(diǎn)每一個(gè)都被一種酶識(shí)別并酶切。

3.質(zhì)粒構(gòu)建

(1)質(zhì)粒構(gòu)建原理

質(zhì)粒構(gòu)建是分子生物學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。原理依賴于限制性核酸內(nèi)切酶,DNA連接酶和其他修飾酶的作用,分別對目的基因和載體DNA進(jìn)行適當(dāng)切割和修飾后,將二者連接在一起,再導(dǎo)入宿主細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的正確表達(dá)。

(2)質(zhì)粒構(gòu)建方式

質(zhì)粒構(gòu)建方式多樣,常規(guī)的T4連接酶,下面就介紹下T4連接酶構(gòu)建質(zhì)粒方法,T4連接酶可用于平末端也可用于粘性末端連接,但一般推薦適用黏性末端。

(3)質(zhì)粒載體的制備

質(zhì)粒載體的制備既可以選擇單酶切也可以選擇雙酶切,一般推薦使用雙酶切。其實(shí)目的就只有一個(gè),盡量使載體的末端具有特異性,防止自連。

4.一般目的基因用于克隆表達(dá)的情況下,酶切位點(diǎn)的選擇要考慮到:

(1)選擇質(zhì)粒上兩個(gè)酶切位點(diǎn)的距離不應(yīng)小于太。>10bp),否則影響限制性內(nèi)切酶對切點(diǎn)的識(shí)別,不利于空載體的雙酶切。

(2)一般目的基因用于克隆表達(dá)的情況下,酶切位點(diǎn)的選擇要考慮到:

目的基因片段內(nèi)部不含有所選的酶切位點(diǎn)(不然鑒定陽性重組子雙酶切時(shí)會(huì)將目的基因切斷)。

(3)實(shí)驗(yàn)后繼應(yīng)用的所有載體(真核、原核、酵母、昆蟲)都盡可能含有所選的酶切位點(diǎn)。并且要保/證在載體上的插入方向正確(定向克隆)。(不然換載體表達(dá)時(shí),還要重新設(shè)計(jì)引物,以引進(jìn)新的酶切位點(diǎn))。

(4)盡可能選比較常用的酶切位點(diǎn)(常用切點(diǎn)酶的價(jià)格比較便宜)。

(5)兩個(gè)酶切點(diǎn)至少隔上3個(gè)堿基。

(6)兩個(gè)酶切點(diǎn)/好不要是同尾酶(切下來的殘基不要互補(bǔ)),否則效果相當(dāng)于單酶切。

(7)/好使用酶切效率高的酶。

(8)/好使用雙酶切有共同buffer的酶。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

產(chǎn)品搜索

請輸入要搜索的關(guān)鍵詞

聯(lián)系我們
  • 公司名稱:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
  • 公司地址:上海市嘉定區(qū)曹安公路5588號(hào)
  • 公司電話:021-58999639
  • 公司傳真:021-58999639
  • 聯(lián)系人:俞燕熙
  • 手機(jī):13310162040
  • 網(wǎng)址:www.yuanmubio.com

上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司:細(xì)胞凍存液,氨芐青霉素溶液,人白介素ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,顯色試劑盒,新生牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,牛血清白蛋白溶液,小鼠血漿,雞紅細(xì)胞,透明質(zhì)酸酶溶液,微生物培養(yǎng)基,胰蛋白酶儲(chǔ)存液,兩性霉素B溶液,LB冷凍緩沖液,ABTS試劑,磷酸酶抑制劑,EB緩沖液,熒光染色試劑盒,肥大細(xì)胞染色液,人源基因質(zhì)粒,胡蔓藤堿乙標(biāo)準(zhǔn)品,番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品,Pd-C-II標(biāo)準(zhǔn)品,知母皂苷E標(biāo)準(zhǔn)品,穿刺培養(yǎng)基,puc19質(zhì)粒,CPD抗凝劑,熒光抗體稀釋液
地址:上海市嘉定區(qū)曹安公路5588號(hào) 電話:021-58999639 傳真:021-58999639 技術(shù)支持:阿儀網(wǎng) 總訪問量:7639442

在線客服
熱線電話

02158999639

13310162040

工作時(shí)間:8:30-18:00

13

阿儀網(wǎng)推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站
美女的小穴被男人捅| 逼特逼av福利| 国产女同互舔一区二区| 木下凛凛子在线视频成人| 日韩精品一品二区三区的使用体验| 国产 中文 日韩 人妻 欧美| 国产精品影视av| 天天日天天鲁BBww| 猛操韩一骚逼| 超碰一区在线| 亚洲乱妇熟女爽高潮| 狠狠干 人妻| 亚洲男女抽插流水| 欧美亚洲国产日韩BT色图| 嗯嗯嗯啊啊免费视频在线播放| 老湿机私人视频| 家庭熟女免费| 青青草一级视频| 黑丝美女逼被捅烂视频| 欧美美女狂插| 日韩欧美美女女优精品一区二区| 秋霞人妻在线视频| 日本一三不卡| 日韩性生活视频网站观看| 亚洲1区2区3区视频| 老逼一区二区| 激情五月综合逼| 亚洲青涩在线播放资源| 青青操在线免费观看视频| 国产剧情巨作无码传媒av在线| 日本人妻伺候黑人| 精品无码1区 2区 3区| 国产女主播日韩在线| 三级国产视频| 天天插操操操操| 红桃av中文字幕| 啊啊啊啊啊啊鸡巴| 熟女的老骚91| 爽歪歪精品视频| 国产精品91一区| 亚洲夫妻性生活|