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技術(shù)文獻(xiàn)

細(xì)菌芽孢染色法實(shí)驗(yàn)報(bào)告
閱讀次數(shù):2114 發(fā)布時(shí)間:2021/1/15 9:53:50
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、基本原理

芽孢染色法是利用細(xì)菌的芽孢和菌體對(duì)染料的親合力不同的原理,用不同染料進(jìn)行著色,使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。芽孢壁厚、透性低,著色、脫色均較困難,因此,當(dāng)先用弱堿性染料,如孔雀綠(malachite green)或堿性品紅(basicfuchsin)在加熱條件下進(jìn)行染色時(shí),此染料不僅可以進(jìn)入菌體,而且也可以進(jìn)入芽孢,進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色,而進(jìn)入芽孢的染料則難以透出,若再用復(fù)染液(如番紅液)或襯托溶液(如黑色素溶液)處理,則菌體和芽孢易于區(qū)分。

二、器材

枯草芽孢桿菌,蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus),生孢梭菌(Clostridium sporogenes);

孔雀綠染液,番紅水溶液,苯酚品紅溶液,黑色素溶液等。

三、操作步驟

方法1、

(1)將培養(yǎng)24小時(shí)左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌,作涂片、干燥、固定。

(2)滴加3—5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。

(3)用木夾夾住載玻片在火焰上加熱,使染液冒蒸汽但勿沸騰,切忌使染液蒸干,必要時(shí)可添加少許染液。加熱時(shí)間從染液冒蒸汽時(shí)開(kāi)始計(jì)算約4—5分鐘。這步也可不加熱,改用飽和的孔雀綠水溶液(約7.6%)染10分鐘。

(4)傾去染液,待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。

(5)用番紅水溶液復(fù)染1分鐘,水洗。

(6)待干燥后,置油鏡觀察,芽孢呈綠色,菌體呈紅色。

方法2、

(1)取二支潔凈的小試管,分別加入0.2ml無(wú)菌水,再往管中加入1—2接種環(huán)的蠟狀芽孢桿菌的菌苔,另管中加入1—2接種環(huán)的生孢梭菌的菌苔,兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。

(2)在菌懸液中分別加入0.2ml苯酚品紅溶液,充分混合后,于沸水浴中加熱3—5分鐘。

(3)用接種環(huán)分別取上述混合液2—3環(huán)于兩片載玻片上,涂薄,風(fēng)干后,將載玻片稍傾斜于燒杯上,用95%乙醇沖洗至無(wú)紅色液流出。

(4)再用自來(lái)水沖洗,濾紙吸干。

(5)取1—2接種環(huán)黑色素溶液于涂片處,立即展開(kāi)涂薄,自然干燥后,油鏡觀察,在淡紫灰色背景的襯托下,菌體為白色,菌體內(nèi)的芽孢為紅色。

四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告  

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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