技術(shù)文獻(xiàn)
瓊脂糖凝膠電泳是檢測(cè)DNA質(zhì)量的一種常用方法。 它利用瓊脂糖溶化再凝固后形成的固體基質(zhì)，在電場(chǎng)作用下，帶負(fù)電的DNA分子向陽遷移，不同大小和構(gòu)型的DNA分子遷移速度不同，從而分離出不同的區(qū)帶。這種方法不僅可用于分離不同分子量的DNA，還能分離相對(duì)分子質(zhì)量相同但構(gòu)型不同的DNA分子。
瓊脂糖凝膠電泳的原理基于DNA分子在電場(chǎng)中的遷移特性。DNA分子在高于等電點(diǎn)的溶液中帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正移動(dòng)。遷移速度取決于DNA分子的分子量和構(gòu)型，分子量越大，遷移速度越慢。瓊脂糖凝膠的濃度也會(huì)影響DNA的遷移率，不同濃度的凝膠可以分離不同大小范圍的DNA－－-片段。
瓊脂糖凝膠電泳鑒定質(zhì)粒DNA
瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA－－-片段的常用方法。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正移動(dòng)。
由于糖磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正方向移動(dòng)。
不同濃度瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至50kb的DNA－－-片段。在瓊脂糖溶液中加入低濃度的溴化乙錠(ethidum bromide ,EB)，在紫外光下可以檢出 10ng的DNA條帶，在電場(chǎng)中，pH8.0條件下，凝膠中帶負(fù)電荷的DNA向陽遷移。
質(zhì)粒DNA提取方法
1，堿裂解法
2，煮沸裂解
3，羥基磷灰石柱層析法
4，質(zhì)粒DNA釋放法
5，酸酚法等。
選擇哪一種方法取決于以下幾個(gè)因素
1，質(zhì)粒的大小
2，大腸桿菌菌株
3，裂解后用于純化的技術(shù)和實(shí)驗(yàn)要求
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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