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技術(shù)文獻(xiàn)

甘油菌種復(fù)蘇與保藏具體步驟
閱讀次數(shù)：591 發(fā)布時(shí)間：2025/2/21 10:59:07

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菌種保藏（culture preservation，culture collection）是保持微生物菌株活力和遺傳性狀的關(guān)鍵技術(shù)。在分子生物學(xué)研究中，經(jīng)過(guò)基因編輯或改造的菌種通常非常珍貴且微量，因此需要進(jìn)行妥善的保藏。以下是具體的操作步驟：

菌種保藏

將待保存的菌液與配好的甘油混合液按1:1比例混合，終達(dá)到20%甘油濃度。配置40%（v/v）甘油滅菌水混合液。

取2ml離心管或保菌管，加入500微升40%甘油-水混合液。

用移液槍吸取500微升菌液，將槍頭深入液面以下緩緩加入。

將離心管或保菌管放入-80℃冰箱保存。

在保菌管上標(biāo)明日期、菌種、抗性等詳細(xì)信息，以便日后識(shí)別。

菌液復(fù)蘇

復(fù)蘇保存的菌液可以進(jìn)行后續(xù)操作。主要步驟如下：

取含有抗性的LB培養(yǎng)基，每個(gè)培養(yǎng)管裝入約八毫升。所有操作均在無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行，以防污染。

向每管加入100微升菌液，37℃、180rpm搖12小時(shí)。

氨芐抗性配置：1g氨芐青霉素鈉溶解于10ml滅菌水中，過(guò)濾后-20℃保存。

LB培養(yǎng)基配置：10g氯化鈉、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物溶于一升體系中，分裝到250ml錐形瓶，每瓶100ml。Amp抗性：100ml培養(yǎng)基加入100微升氨芐抗性。

通過(guò)這些簡(jiǎn)單的步驟，你可以有效地保藏和復(fù)蘇珍貴的菌種，為后續(xù)的分子生物學(xué)研究提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司