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技術(shù)文獻(xiàn)

為啥非得要用瓊脂糖凝膠做電泳載體?
閱讀次數(shù):1046 發(fā)布時間:2022/1/21 10:28:09
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常用的電泳實驗載體:

1、醋酸纖維素薄膜電泳 :醋酸纖維素薄膜電泳是以醋酸纖維素薄膜為支持物,它是纖維素的醋酸酯,由纖維素的羥基經(jīng)乙酰化而制成。

2、 瓊脂糖凝膠電泳 :瓊脂糖凝膠電泳是一種以瓊脂糖凝膠為支持物的凝膠電泳。

3、聚丙烯酰胺凝膠電泳 :聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑又稱為共聚體的N,N’-甲叉雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱PAGE)。

4、等電聚焦電泳 :等電聚焦電泳是利用具有pH梯度的電泳介質(zhì)來分離等電點(pI)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。

瓊脂糖凝膠電泳其分析原理與其它支持物電泳的主要區(qū)別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),直接參與帶電顆粒的分離過程,在電泳中,物質(zhì)分子通過空隙時會受到阻力,大分子物質(zhì)在泳動時受到的阻力比小分子大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅依賴于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量,而且還取決于分子大小,這就大大地提高了分辨能力。

瓊脂糖系天然的瓊脂加工制得,天然瓊脂是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(約占80%)及瓊脂膠組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構(gòu)成的中性物質(zhì),不帶電荷。而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由于這些基團(tuán)帶有電荷,在電場作用下能產(chǎn)生較強的電滲現(xiàn)象。所以常用于血清蛋白、血紅蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶等同工酶的分離和鑒定,為臨床某些疾病的鑒別診斷提供了可靠的依據(jù)。與免疫化學(xué)反應(yīng)相結(jié)合發(fā)展成為免疫電泳技術(shù),用于分離和檢測抗原?蓪δ砍S玫沫傊沁M(jìn)行某些修飾,如引入化學(xué)基團(tuán)羥乙基,則可使瓊脂糖在65℃左右便能熔化,被稱為低熔點瓊脂糖。該溫度低于DNA的熔點,而且凝膠強度又無明顯改變。以此為支持物進(jìn)行電泳,稱為低熔點瓊脂糖凝膠電泳,主要應(yīng)用于DNA研究。如DNA鑒定,DNA限制性內(nèi)切酶圖譜制作等,為DNA分子及其片段分子量測定和DNA分子構(gòu)象的分析提供了重要手段。


總結(jié)瓊脂糖凝膠電泳的優(yōu)點如下:

1. 瓊脂糖凝膠電泳操作簡單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進(jìn)行電泳。

2. 瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻,含水量大(約占98%~99%),近似自由電泳,樣品擴散較自由電流,對樣品吸附微,因此電泳圖譜清晰,分辨率高,重復(fù)性好。

3. 瓊脂糖透明無紫外吸收,電泳過程和結(jié)果可直接用紫外光燈檢測及定量測定。

4. 電泳后區(qū)帶易染色,樣品易洗脫,便于定量測定。制成干膜可長-期保存。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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