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培養(yǎng)懸浮細胞還不會培養(yǎng)?看這里!
閱讀次數:1001 發(fā)布時間:2022/2/14 11:43:08
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小伙伴們都知道,實驗室里培養(yǎng)的動物細胞一般可以簡單地分為兩大類,貼壁細胞和懸浮細胞。貼壁細胞(adherent cells)指的是這類生長必須有可以貼附的支持物表面,只有依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長,繁殖的細胞。當細胞在該表面生長后,一般會形成兩種形態(tài),即成纖維樣細胞或者上皮樣細胞。而另一類則是細胞生長不依賴支持物表面,在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長,這類細胞我們稱之為懸浮細胞。懸浮細胞在顯微鏡下觀察,一般是單個生長的大小均一的圓圓的,亮亮的形態(tài)規(guī)則的細胞形態(tài),也有部分細胞聚集,成團生長。

實際上貼壁生長的細胞跟懸浮的細胞都有很多種;铙w體內的細胞當離體置于體外培養(yǎng)時大多數均以貼壁方式生長,主要包括一些正常細胞和腫瘤細胞,比如成纖維細胞,骨骼組織(骨及軟骨),心肌與平滑肌、肝、肺、腎、乳腺皮膚神經膠質細胞,內分泌細胞,黑色素細胞以及各種腫瘤細胞等。

而少數細胞在體外培養(yǎng)時則是懸浮生長,包括一些取自血、脾或骨髓的培養(yǎng)細胞,尤其是血液白細胞以及淋巴細胞等。

從懸浮細胞的定義上來說,懸浮細胞是不貼壁的,懸浮生長的細胞,所以由此可知懸浮細胞不需要酶的作用就可以使其從培養(yǎng)容器表面脫離,故懸浮細胞傳代培養(yǎng)的方法較為簡單。一般實驗室中常用直接傳代法和離心傳代法(在發(fā)現有細胞碎片的情況下)來處理懸浮細胞。當小伙伴們觀察到懸浮細胞已經長滿至 80%~90%(細胞懸液變黃)的時候,細胞就可以進行傳代操作了。

從顯微鏡下觀察,如果細胞狀態(tài)良好(基本無細胞碎片,細胞形態(tài)規(guī)則)時,則可以選擇直接傳代法。將原瓶中的培養(yǎng)基按比例(具體比例視實驗而定,但是不能太稀,太稀細胞長不起來)分裝到新的培養(yǎng)瓶中,然后補加新鮮培養(yǎng)基(補加的培養(yǎng)基量不能太打,否則會導致細胞因為密度過低而養(yǎng)不起來),然后隔天觀察細胞密度來考慮是否需要補液。

但是當從顯微鏡下觀察,細胞狀態(tài)較差時(細胞碎片較多,細胞形態(tài)不規(guī)則)時,則需要使用離心傳代法。先,要將細胞懸液轉移到離心管內,1000rpm 離心 5 min;然后棄去上層清液,輕輕地將細胞沉淀彈散(盡量不用吹打,會導致細胞狀態(tài)不好甚至死亡),使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞;后用吸管吸取適量細胞懸液,裝入新的培養(yǎng)瓶,再加入適量的新鮮培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。

培養(yǎng)懸浮細胞,如何更換培養(yǎng)基?

如果空間足夠,只需添加適量的新鮮培養(yǎng)基,這是培養(yǎng)懸浮細胞時更換培養(yǎng)基選的方法(少數細胞除外);

也可以通過離心(1000g / 5min)去除舊的培養(yǎng)基后,用新鮮的培養(yǎng)基輕輕地重懸細胞,移入培養(yǎng)瓶。

原創(chuàng)作者:上海遠慕生物科技有限公司

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