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技術(shù)文獻(xiàn)

正置培養(yǎng)霉菌污染原因分析
閱讀次數(shù):1040 發(fā)布時間:2022/2/17 10:33:56
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自GB 4789.15-2016 霉菌和酵母菌計數(shù)正式開始實施以來,正置培養(yǎng)容易造成環(huán)境污染,一直比較困擾大家,很多小伙伴們在后臺跟小編反應(yīng)國標(biāo)霉菌正置培養(yǎng)容易污染,天小編就來為大家分析一下這個問題。

GB 4789.15-2016相比GB 4789.15-2010,大的區(qū)別可能就在于對平皿的培養(yǎng)方式。2016版的國標(biāo)在5.2中要求:瓊脂凝固后,正置平板,置28℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察并記錄培養(yǎng)至第5d的結(jié)果。

其實針對這一條,需要注意兩點:

,是需要對平板進(jìn)行觀察的,不能直接培養(yǎng)至第5天計數(shù),因為霉菌的特殊性,在培養(yǎng)過程中會產(chǎn)生大量孢子,導(dǎo)致整個平板蔓延。因此,在培養(yǎng)后的第2天開始,就要對平板進(jìn)行觀察,并計數(shù)典型菌落,而這樣的觀察在之后每一天都應(yīng)該進(jìn)行,直至培養(yǎng)第5天。

第二,就是正置培養(yǎng)。這一點是16版國標(biāo)與舊版大的區(qū)別,10版之的國標(biāo)都是倒置培養(yǎng)的。而進(jìn)行正置培養(yǎng),很多朋友可能都會遇到平板被霉菌污染的問題,這怎么解決呢?
 


 

污染原因與解決措施

一、培養(yǎng)箱環(huán)境污染

很多實驗室培養(yǎng)霉菌采用的是用的霉菌培養(yǎng)箱,所以培養(yǎng)箱空間里會有大量的霉菌孢子。而平皿的蓋和底是有一定縫隙的,尤其是玻璃平皿縫隙還是比較大的,正置培養(yǎng)中,孢子會向上飛揚通過縫隙落到平板的培養(yǎng)基上,導(dǎo)致污染。細(xì)心地實驗猿可能發(fā)現(xiàn),污染的菌落大部分都是在平皿邊緣生長的。用一次性塑料平皿來培養(yǎng),污染的概率就會小很多,因為一次性塑料平皿的蓋和底之間的縫隙相比之下是比較小的。因此培養(yǎng)箱環(huán)境中的孢子可能會是主要污染源。

這樣一來,解決的方法就應(yīng)該是對培養(yǎng)箱進(jìn)行殺菌?梢杂75%酒精和新潔爾滅兩種消毒劑對培養(yǎng)箱進(jìn)行了全面的消毒,消毒完好不要馬上用,消毒完好放個幾天在使用。

應(yīng)該注意的是,這樣的殺菌操作也是需要經(jīng)常進(jìn)行的,因為霉菌的孢子是十分難清除的,而每次培養(yǎng)可能又會引進(jìn)新的污染源,可以考慮每周進(jìn)行兩次,保證培養(yǎng)環(huán)境無污染源。

二、平皿冷凝水污染

正置培養(yǎng)過程中,若是平皿的上蓋有泠凝水,在培養(yǎng)過程中冷凝水滴落到培養(yǎng)基上,也容易造成菌落蔓延,平皿污染。因此在培養(yǎng)之,一定要保證平皿干燥,可以把平皿放在37℃的環(huán)境里烘干,烘干之后再進(jìn)行培養(yǎng),就會避免這個原因造成的污染。

三、操作環(huán)境和培養(yǎng)基的污染

因為無菌室里可能也會因為滅菌效果不理想造成污染。小編之工作的實驗室,操作臺使用紫外線滅菌,經(jīng)常就會滅菌不徹底有孢子污染,尤其是在進(jìn)行過霉菌的相關(guān)檢測之后。所以在進(jìn)行過霉菌檢測之后,適當(dāng)?shù)脑鲩L滅菌時間,可能會達(dá)到比較理想的效果。另外,為了徹底解決無菌室空間孢子污染的問題,可以購買安裝臭氧發(fā)生器,通過紫外線+臭氧的雙重消毒模式,效果就十分理想了。

大家如果還是想驗證一下究竟是什么原因造成的污染,這里提供一個簡單的驗證試驗:在正常檢測的環(huán)境中倒一組空白平皿,將這些平皿分為AB兩組,其中A組用封口膜將平皿封好,B組不封,均放置在培養(yǎng)箱中正置培養(yǎng)。若是A組B組均有霉菌生長,則需要考慮培養(yǎng)基污染或者操作環(huán)境的污染;若是A組不生長霉菌而B組生長,則需要考慮是培養(yǎng)箱內(nèi)的環(huán)境污染。通過這個小試驗,可以基本上確定污染源,然后針對污染源進(jìn)行相應(yīng)的處理。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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