DNA、RNA和
蛋白質(zhì)是三種重要的生物大分子，是生命現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)。DNA的遺傳信息決定生命的主要性狀，而mRNA在信息傳遞中起著重要的作用。其他兩大類(lèi)RNA，即rRNA和tRNA同樣在蛋白質(zhì)的生物合成中發(fā)揮著不可替代的功能。因此RNA在DNA和蛋白質(zhì)中間起著中介的作用，其重要性不言而喻。
在研究RNA的分子實(shí)驗(yàn)中，獲得高質(zhì)量的RNA至關(guān)重要，但是有些樣本因?yàn)?a target="_blank" title="細(xì)胞" >
細(xì)胞結(jié)構(gòu)特殊、代謝產(chǎn)物極其豐富、本身RNA豐度低等因素，影響到RNA提取質(zhì)量。另外，由于RNA酶的廣泛存在并難以消減的頑強(qiáng)特性，使得RNA的抽提純化更為困難。
那么今天我們針對(duì)RNA提取相關(guān)知識(shí)展開(kāi)簡(jiǎn)短的介紹~
一、 RNA提取原則
(1) 保證RNA分子的完整性
(2) 排除DNA分子的污染
(3) 排除有機(jī)溶劑、金屬離子、蛋白質(zhì)、多糖、多酚、脂類(lèi)的污染
(4) 獲得足量的核酸
(5)方法操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性強(qiáng)
不同組織中RNA豐度示意圖
二、 RNA種類(lèi)
有mRNA、rRNA、tRNA、LncRNA、circRNA、miRNA、piRNA、siRNA等
三、 RNA提取注意事項(xiàng)
1、操作環(huán)境干凈無(wú)灰塵，嚴(yán)格戴好口罩、手套等。
2、實(shí)驗(yàn)所涉及的離心管、槍頭、移液器、電泳槽、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面等要用RNase抑制劑徹底處理。
3、實(shí)驗(yàn)所涉及的試劑、
溶液，尤其是水必須確保RNase-Free。
4、選擇合適的勻漿方法。
5、選擇合適的裂解液。
6、控制好樣品的起始量。
7、控制好裂解液與樣品量的比例。
8、RNA抽提成功的經(jīng)濟(jì)標(biāo)準(zhǔn)是后續(xù)實(shí)驗(yàn)的一次成功，而不是得率。即綜合RNA的得率和純度。
四、 RNA提取原理及常用方法問(wèn)題
1、 RNA提取原理
RNA提取步驟，大致可分為裂解和純化。首先對(duì)樣品裂解，采用機(jī)械力、
化學(xué)試劑等方法將RNA釋放出來(lái)，隨后去除蛋白質(zhì)、糖、酚、金屬離子等雜質(zhì)，再用無(wú)水乙醇、異丙醇沉淀或載體吸附RNA，之后洗滌溶解即可得到核酸。
2、RNA提取常用方法
異硫氰酸胍/苯酚法（如Trizol法）
試劑盒過(guò)柱法
磁珠法
改良方法
3、RNA提取過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題
客服一
