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分析一下免疫組化實(shí)驗(yàn)中一些常見(jiàn)的問(wèn)題和解決措施：

常見(jiàn)問(wèn)題一：所有切片呈陰性
原因分析：
a.緩沖液內(nèi)含疊氮化鈉，抑制酶的活性；
b.染色未完全按照操作步驟進(jìn)行；
c.漏加一種抗體或抗體失活；
d.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)；
e.底物中加入的過(guò)氧化氫少或失活。
解決措施：設(shè)立“陽(yáng)性對(duì)照”。如果陽(yáng)性對(duì)照有了表達(dá)，說(shuō)明染色的全過(guò)程和所有試劑都沒(méi)有問(wèn)題。如果此時(shí)測(cè)試片仍為陰性，便是真實(shí)的陰性，說(shuō)明組織或細(xì)胞沒(méi)有相應(yīng)的抗原表達(dá)。

常見(jiàn)問(wèn)題二：所有切片呈陽(yáng)性
原因分析：
a緩沖液配置中未加氯化鈉和PH值不準(zhǔn)確，洗滌不徹底；
B使用已變色的呈色第五溶液，或呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；
C過(guò)氧化氫濃度過(guò)高，呈色反應(yīng)過(guò)快且粘附劑太厚；
D切片在染色過(guò)程中抗體過(guò)濃，或干片了；
E抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
解決措施：縮短抗體孵育時(shí)間和呈色反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)，染色過(guò)程中防止出現(xiàn)干片情況。

常見(jiàn)問(wèn)題三：切片背景過(guò)深
原因分析：
a.漂洗不夠；
b.切片或涂片過(guò)厚；
c.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血
d.使用全血清抗體稀釋不夠；
e.底物成色反應(yīng)過(guò)久；
解決措施：對(duì)一些新的或少用的抗體顯色時(shí)進(jìn)行監(jiān)控，避免顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

常見(jiàn)問(wèn)題四：切片邊緣著色
原因分析：
a組織邊緣與玻片粘貼不牢，邊緣組織松脫漂浮在液體中，導(dǎo)致洗滌不徹底；
b切片上滴加的試劑未充分覆蓋組織，邊緣的試劑容易先變干，濃度較中心組織高而致染色深。
解決措施：組織的期處理應(yīng)規(guī)范，試劑要充分覆蓋組織，盡量避免選用壞死較多的組織。